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液相色譜定性/定量分析

更新時間:2016-12-08點擊次數(shù):11072

液相色譜定性/定量分析
 

在定性的基礎上定量,需有純物質(zhì)作為標準物液相色譜定量是相對定量的方法:即由已知量的純標樣推算混合物中被測物的量定量的依據(jù)是:

a)被測組分的量與響應值(峰高或峰面積)成正比

b)由已知量的標樣可求得定量校正因子

c)定量校正因子:是定量計算公式中的比例常數(shù),其物理意義是單位響應值(峰面積)所代表的被測組分的量

d)測定未知組分的響應值,通過定量校正因子即可求得其含量
 

常用的定量方法

外標法:在液相色譜中用得zui多

內(nèi)標法:準確,但是麻煩,在標準方法中用得zui多

 

鑒別需定量的色譜峰(定性)

色譜峰定性鑒別每個要定量的色譜峰

首先用標樣確定欲定量之色譜峰的保留時間(Rt),通過比較保留時間,找到未知樣中各色譜峰所對應的組份,色譜定性是用與標樣比較保留時間的方法,判據(jù)并不充分進一步的確認(定性)
1、標準加入法

2、同時用其它方法:其它色譜方法(改變機理,如:用不同的色譜柱) 
3、其它儀器方法

液相色譜定量分析的步驟

1、選擇一個適合定量分析的色譜方法:
a)首先確認被檢測組分峰,并達到分離度(R)大于1.5

b)被確定被測組分色譜峰的一致性(純度)

c)確定方法的檢測限及定量限;靈敏度及線性范圍

2、建立校正曲線需用不同濃度的標準樣品

3、檢驗定量方法的準確度及精密度

4、用相應的色譜管理軟件實施樣品采集,數(shù)據(jù)處理及報告結(jié)果
 

確認色譜峰的一致性(純度)

確保每個峰下只有一個被測的組份(不能重合峰)

檢查是否有共流出的物質(zhì)(雜質(zhì))干擾
 

色譜峰一致性(純度)確認的方法

用液相檢測器比較譜圖

峰純度鑒定

 

 

影響定量分析結(jié)果的因素

準確度不好可能由下述原因造成:

–峰面積積分不正確、樣品分解或制樣時導入雜質(zhì)、樣品瓶不密封,樣品或溶劑揮發(fā)、制樣不正確、進樣問題、內(nèi)標制備不正確

 

精密度不好可能的原因:

峰積分不正確、進樣或進樣器有問題、樣品分解或制樣時引入了雜質(zhì)、色譜本身問題、檢測器靈敏度下降

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